Institución de Florencio Varela, zona sur del Gran Buenos Aires. El club se afianzó en la Primera División de AFA en 2014 tras un ininterrumpido ascenso desde las categorías menores, coronándose campeón en torneos internacionales de Conmebol.
El 20 de marzo de 1935, un grupo de vecinos y comerciantes de la localidad de Florencio Varela labró el acta fundacional del Club Social y Deportivo Defensa y Justicia. En sus primeros años, la entidad funcionó como un espacio orientado a actividades sociales y recreativas para la comunidad de la zona sur del Gran Buenos Aires. El desarrollo de la disciplina futbolística se inició de forma amateur, utilizando indumentaria de color azul y blanco y compitiendo exclusivamente en campeonatos regionales no federados.
Tras décadas de actividad regional, el club fue aceptado como miembro afiliado de la Asociación del Fútbol Argentino el 20 de diciembre de 1977. Este acontecimiento le permitió debutar oficialmente en el Campeonato de Primera D de 1978. Durante este período fundacional del profesionalismo, la institución entabló un acuerdo de patrocinio con la línea de transporte de pasajeros 'El Halcón'. Como resultado de esta vinculación, Defensa y Justicia modificó los colores de su indumentaria adoptando definitivamente el verde y el amarillo, y asimiló el apodo derivado de dicha empresa.
Luego de un progresivo ascenso deportivo a lo largo de las décadas de 1980 y 1990 transitando por las divisiones D, C y B Metropolitana, la institución obtuvo el campeonato de Primera B en la temporada 1996-1997. El logro le garantizó el ascenso a la Primera B Nacional, la segunda categoría del fútbol argentino. La llegada a esta divisional representó el primer salto significativo del club a nivel competitivo, iniciando una etapa de 17 años de participación regular en torneos de alcance federal.
En el marco de la temporada 2013-2014 de la Primera B Nacional, el equipo dirigido por el entrenador Diego Cocca logró el primer ascenso de su historia a la máxima categoría del fútbol profesional argentino. Basado en un estilo de juego organizado y de marcada tendencia ofensiva, Defensa y Justicia finalizó el torneo en la segunda posición de la tabla general, lo que le permitió asegurar matemáticamente su promoción con antelación y radicar su nombre de manera definitiva en la Primera División.
Durante el año 2020, bajo la conducción técnica de Hernán Crespo, el club protagonizó su campaña internacional más destacada al participar en la Copa Sudamericana. El equipo desplegó un funcionamiento táctico caracterizado por la posesión y agresividad ofensiva, superando de manera invicta las etapas de eliminación directa. El 23 de enero de 2021, en la final disputada en el estadio Mario Alberto Kempes de la ciudad de Córdoba, Defensa y Justicia derrotó a Lanús por 3-0 y se coronó campeón, obteniendo el primer título internacional de su historia.